微量紫外可見分光光度計是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,發生了電子能級躍遷而產生的吸收光譜。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
分光光度分析就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。根據Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比,比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響,即得朗伯一比耳定律。即A=sbc,(A為吸光度,s為摩爾吸光系數,b為液池厚度,c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質,則兩者的光譜圖應*一致。如果沒有標樣,也可以和現成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確,精密度高,且測定條件要相同。
微量紫外可見分光光度計主要由光源系統、單色器系統、樣品室、檢測系統組成:
光源:發出所需波長范圍內的連續光譜,有足夠的光強度,穩定??梢姽鈪^:鎢燈,碘鎢燈(320~2500nm)紫外區:氫燈,氘燈(180~375nm);氙燈:紫外、可見光區均可用作光源。
單色器:將光源發出的連續光譜分解為單色光的裝置。
棱鏡:依據不同波長光通過棱鏡時折射率不同。
光柵:在鍍鋁的玻璃表面刻有數量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。利用光通過光柵時發生衍射和干涉現象而分光。
吸收池:用于盛待測及參比溶液??梢姽鈪^:光學玻璃池;紫外區:石英池。
檢測器:利用光電效應,將光能轉換成電流訊號。光電池,光電管,光電倍增管。
檢流計(指示器):刻度顯示或數字顯示、自動掃描記錄。